Estandarización de una prueba de PCR en tiempo real múltiple para la identificación de Angiostrongylus cantonensis, A. costaricensis y A. vasorum.
| dc.contributor.author | Varela Miranda, Ruben Eduardo | |
| dc.date.accessioned | 2019-08-05T22:06:11Z | |
| dc.date.available | 2019-08-05T22:06:11Z | |
| dc.date.issued | 2018 | |
| dc.description.abstract | Introducción. Angiostrongylus spp. son parásitos que se encuentran en todo el mundo y pueden causar enfermedades. Algunas especies patógenas están emergiendo y re-emergiendo en países del Caribe y Sudamérica, donde se asocian con la presencia del caracol Achatina (= Lissachatina) fulica. Los métodos diagnósticos para las angiostrogilosis son escasos, con baja sensibilidad, no específicos y costosos. Objetivo. Desarrollar un test qPCR múltiple que identifique tres especies patógenas de Angiostrongylus: A. cantonensis, A. costaricensis y A. vasorum. Materiales y métodos. Se seleccionó la secuencia de una región ITS-2 del genoma de Angiostrongylus, previo análisis bioinformático para garantizar la especificidad del cebador y las sondas. Se extrajo el ADN de Angiostrongylus adultos (control positivo) y de larvas de nemátodos con el DNeasy® Blood&Tissue kit. La reacción usada se llevó a cabo en un termociclador Smartcycler Cepheid® utilizando un master mix QuantiTect® kit. Como controles negativos usamos ADN de otros parásitos, de humanos y de caracol africano de Santa Fe de Antioquia. Resultados. La prueba identificó sin errores cada uno de los cinco controles positivos de Angiostrongylus, procedentes de diferentes países. Los valores Ct fueron: 21 para A. cantonensis, 22 para A. costaricensis y 31 para A. vasorum. Ninguno de los controles negativos amplificó en la qPCR para 40 ciclos (Ct: 0).La temperatura de amplificación (TM) para la reacción múltiple fue de 60° C. La qPCR presentó una eficiencia de amplificación del 100 %. Conclusiones. La prueba qPCR múltiple estandarizada para tres especies de Angiostrongylus permite la identificación específica de las muestras de ADN en una sola reacción. | en_US |
| dc.identifier.issn | 0120-4157 | |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.usc.edu.co/handle/20.500.12421/478 | |
| dc.language.iso | es | en_US |
| dc.publisher | Biomedica : revista del Instituto Nacional de Salud | en_US |
| dc.subject | Angiostrongylus | en_US |
| dc.subject | Angiostrongylus cantonensis | en_US |
| dc.subject | reacción en cadena en tiempo real de la polimerasa | en_US |
| dc.subject | reacción en cadena de la polimerasa multiplex | en_US |
| dc.title | Estandarización de una prueba de PCR en tiempo real múltiple para la identificación de Angiostrongylus cantonensis, A. costaricensis y A. vasorum. | en_US |
| dc.type | Article | en_US |
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