Estandarización de una prueba de PCR en tiempo real múltiple para la identificación de Angiostrongylus cantonensis, A. costaricensis y A. vasorum.
No Thumbnail Available
Date
2018
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Biomedica : revista del Instituto Nacional de Salud
Abstract
Introducción. Angiostrongylus spp. son parásitos que se encuentran en todo el mundo y pueden causar enfermedades. Algunas especies patógenas están emergiendo y re-emergiendo en países del Caribe y Sudamérica, donde se asocian con la presencia del caracol Achatina (= Lissachatina) fulica. Los métodos diagnósticos para las angiostrogilosis son escasos, con baja sensibilidad, no específicos y costosos. Objetivo. Desarrollar un test qPCR múltiple que identifique tres especies patógenas de Angiostrongylus: A. cantonensis, A. costaricensis y A. vasorum. Materiales y métodos. Se seleccionó la secuencia de una región ITS-2 del genoma de Angiostrongylus, previo análisis bioinformático para garantizar la especificidad del cebador y las sondas. Se extrajo el ADN de Angiostrongylus adultos (control positivo) y de larvas de nemátodos con el DNeasy® Blood&Tissue kit. La reacción usada se llevó a cabo en un termociclador Smartcycler Cepheid® utilizando un master mix QuantiTect® kit. Como controles negativos usamos ADN de otros parásitos, de humanos y de caracol africano de Santa Fe de Antioquia. Resultados. La prueba identificó sin errores cada uno de los cinco controles positivos de Angiostrongylus, procedentes de diferentes países. Los valores Ct fueron: 21 para A. cantonensis, 22 para A. costaricensis y 31 para A. vasorum. Ninguno de los controles negativos amplificó en la qPCR para 40 ciclos (Ct: 0).La temperatura de amplificación (TM) para la reacción múltiple fue de 60° C. La qPCR presentó una eficiencia de amplificación del 100 %. Conclusiones. La prueba qPCR múltiple estandarizada para tres especies de Angiostrongylus permite la identificación específica de las muestras de ADN en una sola reacción.
Description
Keywords
Angiostrongylus, Angiostrongylus cantonensis, reacción en cadena en tiempo real de la polimerasa, reacción en cadena de la polimerasa multiplex